実験TIPS

Tris-Tricine SDS-PAGEのゲル組成，泳動バッファー組成は「Tris-Tricine SDS-PAGE」をご覧下さい。

• 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)

• 0.5 M Tris-HCl (pH 6.8)

• 30％ アクリルアミド/ビス溶液：冷暗所保存

• 10％ SDS (sodium dodecyl sulfate：ドデシル硫酸ナトリウム)

• 10％ APS (ammonium persulfate：過硫酸アンモニウム)：用事調製

• TEMED (N,N,N’,N’-tetramethyl ethylenediamine)

• Tris-Glycine SDS buffer：25 mM Tris, 192 mM Glycine, 0.1％ SDS

• 125 mM Tris-HCl（pH6.8）, 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-mercaptoethanol（もしくは200 mM DTT）, 0.02% BPB

1. 重層した蒸留水またはを水飽和1-ブタノールを取り除く

2. 調製した濃縮ゲル溶液を注ぐ

3. 空気が入らないように注意しながらコームを挿し込む

4. ゲルが固まるまで静置する（ゲル溶液のあまりでゲル化具合を確認できる（酸素との接触に注意する））

5. ゲルを保管する場合は、チャック付き袋やラップで包み4℃で保管する（さらに蒸留水で湿らせたワイパーを入れることで乾燥を防ぐことができる）

1. 分析するタンパク質溶液と 2×サンプルバッファーを1:1で混合する

2. 95℃で5分間加熱した後、氷上に置く

1. シールガスケット、クリップを外す

2. 泳動槽へゲルをセットする

3. 泳動バッファーを注ぐ

4. コームを外す

 

• 49.5％ アクリルアミド/ビス溶液（C:3% )：冷暗所保存

• 3 M Tris-HCl（pH 8.45）, 0.3％ SDS

• 10％ APS（ammonium persulfate：過硫酸アンモニウム）

• TEMED（N,N,N’,N’-tetramethyl ethylenediamine）

• 陽極側バッファー：0.1 M Tris-HCl（pH 8.9）

• 陰極側バッファー：0.1 M Tris, 0.1 M Tricine, 0.1 M SDS

• 150 mM Tris-HCl（pH7.0）, 12% SDS, 6% 2-mercaptoethanol（もしくは400 mM DTT）, 30% Glycerol, 0.05% CBB

• 調製した分離ゲル溶液をプレートに注ぐ

• 注いだ分離ゲル溶液の上に蒸留水を静かに重層する

• ゲルが固まるまで静置する（ゲル溶液のあまりでゲル化具合を確認できる（酸素との接触に注意する））

*1 SDS存在下において加熱すると凝集するタンパク質は，40℃で30～60分とする。

*2 下部バッファー槽に陽極側バッファーを，上部バッファー槽には陰極バッファーをそれぞれ注ぐ。