pET vector : BDL｜株式会社バイオダイナミクス研究所


		pET Expression pack

T7プロモーター系E.coli高発現pETベクターとヒートショック不要の発現用コンピテントセルのセット

pET Expression packはpET発現ベクターと発現用コンピテントセルの^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)とのセットです。

	pETベクター pETベクターは強力なT7プロモーターによる発現ベクターです。高コピー、中程度コピー、LacIにより発現をコントロールできるベクターの3種類があり、それぞれ、薬剤耐性マーカーはアンピシリンとカナマイシンの2種類から選べます。さらに目的遺伝子の導入部位によりHis-Tag融合タンパク質、またはタグなしタンパク質をそれぞれ発現可能です。

	^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3) Zip BL21(DE3)は5分間の短時間操作で形質転換を可能にした発現用コンピテントセルです。プラスミドDNAをZipコンピテントセルBL21(DE3)に加えるだけで、ピートショックもその後の培養も不要で、そのままプレーティングできます。

pETシステムについて

T7発現システムはT7プロモーターを有するpET発現ベクターと，BL21(DE3)大腸菌株などのT7 RNAポリメラーゼ遺伝子が組み込まれたバクテリオファージλDE3の溶原菌を宿主として用いた，強力な発現システムです。
BL21(DE3)大腸菌ゲノム中のlac UV5プロモーター支配下にあるT7 RNAポリメラーゼ遺伝子は，isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside (IPTG)添加により発現誘導されます。発現したT7 RNAポリメラーゼは，pETベクターのT7プロモーターを認識し，T7プロモーター下流に導入された目的タンパク質配列を強力に発現させます。

ベクターの特徴

	6種類のベクターのマルチクローニングサイトは全て共通です。そのため、シリーズ間で他のベクターへのサブクローニングが容易に行えます。
	ベクターのサイズが小さいため、大きなサイズのインサートを挿入しても高効率の形質転換が期待できます。
	N末端にHisタグを融合したタンパク質を発現できます。また、クローニングサイト中のNdeI部位に目的遺伝子を挿入すると、タグなしのタンパク質を発現できます。

ベクターの選択について

発現する蛋白質の宿主大腸菌への影響が明らかでないとき、またベクターの選択に迷ったときは、pETBAをお試しください。非誘導時に発現を抑えたいときは、pETIAの使用が考えられます。発現する蛋白質が宿主大腸菌にあまり影響しないときは、pETUAを使用すると、プラスミドのコピー数が多いため、ミニプレップ、シークエンシング等、しやすいメリットがあります。pETUK、pETBK、pETIKについてもそれぞれpETUA、pETBA、pETIAと同様な特長があります。アンピシリン耐性のクローニングベクターからのサブクローニングに有効です。

ベクター	プラスミドコピー数	薬剤耐性	特長・用途
pETUA	高い（500-700個）	アンピシリン	ﾌﾟﾗｽﾐﾄﾞﾌﾟﾚｯﾌﾟが容易、非毒性蛋白質発現
pETBA	中程度（10-20個）	アンピシリン	広い種類の蛋白質発現に使用
pETIA	中程度（10-20個）	アンピシリン	非誘導時の蛋白質発現の抑制
pETUK	高い（500-700個）	カナマイシン	ﾌﾟﾗｽﾐﾄﾞﾌﾟﾚｯﾌﾟが容易、非毒性蛋白質発現
pETBK	中程度（10-20個）	カナマイシン	広い種類の蛋白質発現に使用
pETIK	中程度（10-20個）	カナマイシン	非誘導時の蛋白質発現の抑制

pETIAでの発現　（lac I　での制御）

M : DynaMarker Protein Eco (DM610)
1 : 培養開始3.5時間後A　（IPTG誘導無）
2 : 培養開始3.5時間後B　（IPTG誘導直前）
3 : 培養開始5.5時間後A　（IPTG誘導無）
4 : 培養開始5.5時間後B　（IPTG誘導後2時間）
5 : 培養開始7.5時間後A　（IPTG誘導無）
6 : 培養開始7.5時間後B　（IPTG誘導後4時間）
pETIAではlacIにより厳密な発現制御がなされるため、非誘導時の発現が極めて低レベルに
抑えられる。

^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3) の特徴

	約5分間で形質転換操作を終了でき、操作時間の大幅な短縮が可能です。
	形質転換効率：≧2×10⁶ CFU/μg (pUC19)
	1回の操作で使い切れるように100 μLずつチューブに小分けされています。

操作法概略

本ベクターとコンピテントセルを用いた各種タンパク質発現例

M : DynaMarker Protein Eco (DM610)
1 : pETUKによる 65 KDa protein発現
2 : pETBA による 65 KDa protein発現
3 : pETUAによる 45 Da protein発現
4 : pETBAによる 44 KDa protein発現
5 : pETBK による 44 KDa protein発現
6 : pETIKによる 30 KDa protein発現

商品コード	商品名	容量	価格※1	製品マニュアル	Sequence
DS255UA	pET Expression pack (pETUA)	・ｐET Expression Vector pETUA： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語
DS255BA	pET Expression pack (pETBA)	・ｐET Expression Vector pETBA： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語
DS255IA	pET Expression pack (pETIA)	・ｐET Expression Vector pETIA： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語
DS255UK	pET Expression pack (pETUK)	・ｐET Expression Vector pETUK： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語
DS255BK	pET Expression pack (pETBK)	・ｐET Expression Vector pETBK： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語
DS255IK	pET Expression pack (pETIK)	・ｐET Expression Vector pETIK： 15 μg ・^{DynaCompetent® Cells} Zip BL21(DE3)： 100 μL　×3本	26,000円	日本語英語

※1　BDL製品をご購入の際は、フナコシ株式会社製品取扱販売店にご注文下さい。
※2　上記商品、DS255UA、DS255BA、DS255IA、DS255UK、DS255BK、DS255IKは米国へは販売いたしません。
　　　　また米国でのご使用はできません。

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